3M測試片談談霉菌和酵母菌的測驗片計數

（一)原理

　　Pctrifilm TM酵母菌和霉菌(Pctrifilm TM Yeast and Mold, PYM)3M測試片是一種預先制備好培育基的霉菌和酵母菌計數的卡片。培育基中有作為載體的冷水可溶性凝膠和對酵母菌和霉菌敏感的5-溴-4-氯-3吲哚基-磷酸鹽指示劑，以及按捺細菌成長的四環素、氯霉素。圓形成長區域劃分為30個1 cm x1 cm的方格用來計數。

　　(二)設備和資料

　　恒溫培育箱(25 ℃~28 ℃),冰箱(0℃~4℃),均質器(旋刀式或拍擊式),移液器， Pctrifilm TM測驗片壓板，振蕩器，天平(感量0.1 g),培育基和試劑， Pctrifilm TM酵母菌和霉菌3M測試片，稀釋液， Butterfield's磷酸鹽緩沖液， 0.1%蛋白胨水。

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　　1.固體

　　以無菌操作將25 g樣品加入到225 mL的稀釋液(磷酸鹽緩沖液或0.1%蛋白胨水)中，8000 r/min均質2 min (或放入無菌均質袋中，用均質器敲打2min),制成1 :10樣品勻液。

　　2.液體

　　取25 mL樣品原液，放入裝有225 mL,稀釋液的無菌玻璃瓶中，以30 cm起伏， 7s內振搖25次，制成1 : 10樣品勻液。

　　將上述勻液做10倍系列梯度稀釋，根據樣品的污染程度，選擇適宜的2個-3個連續稀釋度，每個稀釋度接種2張測驗片。

　　將PYM查驗測驗片放在平整的試驗臺上，揭開上層膜，用移液器將1 ml樣液加到測驗片的中央，悄悄覆蓋上層膜，用壓板平穩壓下，使其均勻覆蓋在測驗片的圓形培育面積上，拿起壓板，靜置至少1 min,使培育基凝固。

　　將測驗片的通明面朝上放置于培育箱內，堆疊不能超過20片，在25℃-28 ℃下培育3d-5d。

　　3.判讀

　　培育3d后調查計數，假如5d后，測驗片上的菌成長過快，呈現邊際含糊的菌落，就用3d的計數成果作為估量菌落數。

　　在PYM測驗片上，色彩均勻一致，灰白色到藍綠色或粉紅色，沒有暗色中心，鴻溝顯著的小型隆起菌落計為酵母菌。色彩多樣(棕色、米色、橙色、藍綠色等)、中心色彩深暗的大型或小型扁平分散菌落計為霉菌。

　　(四)成果核算

　　選取菌落數在15~150之間的測驗片計數，平均菌落數乘以稀釋倍數陳述。

　?、偌偃缢邢♂尪鹊臏y驗片上均無菌落成長，則以小于1乘以低稀釋倍數陳述。

　?、诩偃缢邢♂尪葴y驗片上的菌落數都小于15,則計數稀釋度低的測驗片上的平均菌落數乘以稀釋倍數陳述。

　?、奂偃绺呦♂尪鹊木鋽荡笥?50,計數高稀釋度的測驗片上的平均菌落數乘以稀釋倍數陳述。計數菌落數大于150個的測驗片時，可計數一個或兩個具有代表性方格內的菌落數，換算成單個方格內(1cm2)的菌落數后乘以30即為測驗片上預算的菌落數(圓形成長面積為30 cm)。

　　計數在測驗片上呈現堆積和彼此覆蓋的霉菌菌落，可將測驗片分紅幾個區域，核算每個顯著暗色中心的菌落。很多的酵母菌或許會導致整個成長區域呈現藍色，很多的霉菌也可導致整個成長區域呈現藍、黑、黃等色彩，此刻測驗片中央或許沒有可見菌落，但圓形培面積的邊際有許多小型菌落。當產生這種情況時，不要預算菌落數，其成果計為“多不可計“ (too numerous to count, TNTC)。

　　陳述每克或每毫升樣品中霉菌、酵母菌數，以“CFU/g或CFU/mL"表明。